一、前言

非洲猪瘟（ASF）病由非洲猪瘟病毒（ASFV）引起，ASFV感染家猪、疣猪和南非野猪。该病通过健康和患病动物之间的直接接触，或通过受感染的饲料间接接触，以及通过生物载体（软蜱）进行传播。有特急性、急性、亚急性和慢性的发病形式，其中，急性疾病潜伏期短，大约3-7天，伴随高烧（可达42°C），并在5-10天内死亡。由于猪感染的病毒毒力的不同，死亡率从0％到100％不等，任何地区或国家暴发疫情时，都对当地的生猪养殖业及相关行业造成破坏性影响，但是，目前还没有证实ASF有感染人的风险。

非洲猪瘟与猪瘟的其他出血性疾病的症状和病变都很相似，其亚急性型和慢性型在生产现场实际上难以区别的，因而必须用实验室诊断方法才能鉴别。包括以病原学为基础的病毒分离-血细胞吸附试验、直接免疫荧光法、普通PCR和荧光定量PCR及双抗体夹心ELISA测定ASFV抗原，以及以血清学为基础的间接ELISA测定ASF特异性抗体、免疫印迹和间接免疫荧光测抗体等方法。而常规PCR或实时荧光定量PCR核酸检测技术，是目前用于检测非洲猪瘟最有效的检测方法，具有检测灵敏度高、特异性好等优点。因而，对于样品的前处理以及洲猪瘟病毒核酸的提取是至关重要的前提。

二、检测标准

本实验方案的引用标准主要有：非洲猪瘟诊断技术 GB/T 18648-2002。

在所有方法其中最受关注的是PCR法，PCR已成功应用于猪样品（血液、器官、肉制品等）和蜱中ASFV基因组的检测。ASFV为DNA病毒，核酸稳定性高，所有经过验证的PCR技术均可以在活体猪临床症状出现前实现检测。PCR是可以代替病毒分离鉴定的一种灵敏、特异、快速的ASFV 检测技术。同时，相比于抗原检测技术，如酶联免疫吸附试验（ELISA），PCR具有更高的敏感性和特异性。PCR技术本身还分为成本较低的普通PCR电泳法和速度更快的实时荧光PCR法（qPCR）。

在《陆生动物诊断试验和疫苗手册》（2016年）中推荐使用的常规和实时荧光PCR得到了长期的充分验证，是常规诊断的重要工具。引物和探针多以VP72编码区域作为靶基因设计，同样可检测的编码病毒结构蛋白基因还有p54、K205R等，基因越稳定、在宿主体内复制转录越早则越适合作为PCR靶基因。

在检测过程中要严格遵守实验室生物安全操作规范。样品检测前，要在生物安全柜中对样品进行处理和灭活，每批样品检测结束后，要对检测过程中产生的废物、废液等进行消毒和无害化处理，对相关仪器、工作台面、环境进行严格消毒。检测任务完成后，要对所有剩余样品进行高温高压处理，做好样品销毁记录，不得留样。

三、主要检测设备（便捷式实时荧光定量PCR仪）产品详细资料网站：http://www.molarray.com/product_show.aspx?id=15